麒麟竭中龍血素A的藥動(dòng)力學(xué)研究論文示例
1儀器與材料
1.1動(dòng)物
SD大鼠66只，體質(zhì)量（250±20）g，雌雄兼?zhèn)洌芍猩酱髮W(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：（粵）2006A064。
1.2儀器
Waters高效液相色譜儀：515 HPLC泵，2487雙波長(zhǎng)吸收監(jiān)測(cè)器，N-2000雙通道色譜工作站（浙江大學(xué)智能信息工程研究所）；TDL80-2B臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；SCQ5201超聲儀（上海超聲波儀器廠）；ZH-2 BLENDER渦旋混合器（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠）。
1.3材料
廣西產(chǎn)龍血竭（廣西中醫(yī)學(xué)院制藥廠提供）；龍血素A對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：200402）；乙腈、甲醇（色譜純），乙酸乙酯、無(wú)水乙醇、冰醋酸（分析純）。
2方法與結(jié)果
2.2血樣的采集和處理
大鼠禁食（自由飲水）12 h后，按100 g大鼠給予龍血竭250 mg，灌胃給藥。分別在第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10 h于頸動(dòng)脈取血，置于用肝素預(yù)處理過(guò)的離心管中。取全血1 mL置離心管中，加入乙腈2 mL、乙酸乙酯1 mL，渦旋混合均勻，3 000 r·min-1離心10 min，取上清液，提取3次，合并上清液，50 ℃水浴揮干，于殘?jiān)屑尤?00 μL甲醇，超聲處理使之溶解，12 000 r·min-1離心10 min，取上清液作為樣品，注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖與峰面積，采用外標(biāo)法定量。
2.3方法學(xué)考察[3]
2.3.1龍血素A對(duì)照品貯備液的制備取龍血素A對(duì)照品，用甲醇配制成每1 mL約含100 μg的溶液，作為對(duì)照品貯備液。
2.3.2方法專屬性取大鼠2只，實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，自由飲水，1只做空白對(duì)照，1只按100 g給予龍血竭250 mg灌胃給藥，給藥2 h后取血樣，按“2.2”項(xiàng)下方法操作測(cè)定。由圖1可見(jiàn)，全血中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾龍血素A的測(cè)定，表明本方法有較好的.專屬性。[PSD261;S*2〗A.空白血漿； B.空白血漿+對(duì)照品； C.樣品圖1 HPLC圖譜Figure 1HPLC chromatograms
2.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線與最低檢測(cè)限取空白全血適量，精密加入龍血素A對(duì)照品儲(chǔ)備液，配制質(zhì)量濃度為0.076、0.151、0.302、0.605、1.209、2.418、4.836 μg·mL-1的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“2.2”項(xiàng)下的方法，自“加乙腈2 mL、乙酸乙酯1 mL”起，依法操作，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度（ρ）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，結(jié)果表明龍血素A的質(zhì)量濃度在0.076～4.836 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程為：A=49679ρ+2784.3，r=0.998 3（n=7）。取標(biāo)準(zhǔn)曲線用溶液，逐步稀釋至溶液中龍血素A的響應(yīng)值約為基線噪音的3倍（S/N=3），記錄色譜圖，得出最低檢測(cè)限（LOD）為0.025 μg·mL-1。
2.3.4相對(duì)回收率與精密度精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液，以空白全血分別配成高、中、低3種質(zhì)量濃度（4.836、1.209、0.076 μg·mL-1）的樣品溶液，按 “2.2” 項(xiàng)下的方法，自 “加乙腈2 mL、 乙酸乙酯 1 mL”起，依法操作。記錄峰面積并代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各樣品濃度，計(jì)算相對(duì)回收率。結(jié)果表明，高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的樣品的相對(duì)回收率均高于80%。見(jiàn)表1。取以上高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的樣品溶液于同一天內(nèi)連續(xù)測(cè)定3次，計(jì)算日內(nèi)RSD;每天測(cè)定3種濃度樣品各1次，連續(xù)測(cè)定3 d，計(jì)算日間精密度RSD。結(jié)果日內(nèi)和日間精密度RSD值均小于10%，表明該法精密度較好。見(jiàn)表1。
2.3.5樣品穩(wěn)定性精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液，以空白全血配制質(zhì)量濃度為0.076、0.605、1.209、2.418 μg·mL-1的樣品，分別考察室溫25 ℃放置0、4、12、24 h，-20 ℃冰箱放置24 h，-20 ℃下反復(fù)凍融3次的穩(wěn)定性。結(jié)果各樣品的RSD值均在2.76%～11.42%（n=6）之間，符合《中國(guó)藥典》相關(guān)規(guī)定，表明樣品穩(wěn)定性較好。
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